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Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒

du te的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因組DNA去除方案和內(nèi)質(zhì)控的一種快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染，同時(shí)內(nèi)質(zhì)控RNA可以監(jiān)測逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增反應(yīng)是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的一切。合成的cDNA適用于進(jìn)行real-time PCR, 可以對任何mRNA區(qū)域的靶向序列進(jìn)行可靠定量。

Performance

du te的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA樣本中的基因組DNA污染。去除基因組DNA污染對于獲得精確基因表達(dá)結(jié)果非常關(guān)鍵，并且在不能設(shè)計(jì)出RNA特異性的引物時(shí)，例如當(dāng)分析單外顯子基因時(shí)，也需要去除基因組DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以節(jié)省時(shí)間和成本，因?yàn)椴恍枰诜磻?yīng)中或反應(yīng)后單獨(dú)進(jìn)行DNase消化。 

全新開發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時(shí)被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，可直接反應(yīng)儀器或相應(yīng)試劑是否正常，實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的體系是否存在錯(cuò)誤，以及反應(yīng)體系中是否存在抑制劑。預(yù)期的Cq (CT)范圍可以用來確認(rèn)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的成功與否，以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。 

Qiagen 超敏探針RT-PCR試劑盒

QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA親和性確保您可從任何RNA模板獲得高產(chǎn)率cDNA。即便是難擴(kuò)增模板，如高GC含量或含有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板，也可被成功進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。Reverse Transcription Mix包含一種特別優(yōu)化的oligo-dT和隨機(jī)引物混合物，可以從包括5’區(qū)域在內(nèi)的RNA轉(zhuǎn)錄本的任何位置進(jìn)行cDNA合成。無論擴(kuò)增靶標(biāo)位于轉(zhuǎn)錄本的哪個(gè)位置，該試劑盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高產(chǎn)量cDNA。同時(shí)對于低表達(dá)豐度的基因, 該試劑盒還可提供更高靈敏度的檢測能力。 

QuantiNova Reverse Transcription Kit可在較寬的起始量范圍內(nèi)提供精確的結(jié)果，在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方案中起始RNA量可zui高達(dá)5 µg，在特殊要求的實(shí)驗(yàn)條件下該用量可以加倍。 

Principle

QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA親和性，可以在極寬的模板量范圍內(nèi)（10 pg– 5 μg）合成cDNA（見圖：5 µg–10 pg起始 RNA的精確定量）。無論擴(kuò)增靶標(biāo)位于轉(zhuǎn)錄本的哪個(gè)位置，該試劑盒可提供用于real-time PCR分析的高產(chǎn)量cDNA。即使難擴(kuò)增模板，比如高GC含量或含有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板，也可被成功進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。QuantiNova RT Buffer經(jīng)過優(yōu)化，可兼容real-time PCR緩沖液。

為獲得精確的real-time RT-PCR基因表達(dá)檢測結(jié)果，非常重要的一點(diǎn)是保證只有cDNA被擴(kuò)增和檢測到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因組DNA干擾(見圖：有效去除gDNA污染保證準(zhǔn)確定量轉(zhuǎn)錄本）。使用gDNA Removal Mix節(jié)省了時(shí)間和成本，因?yàn)椴恍枰诜磻?yīng)中或反應(yīng)后單獨(dú)進(jìn)行DNase消化。同時(shí)，也無需設(shè)計(jì)RNA特異性引物或探針。

檢測cDNA合成的差異度可以顯示實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。全新開發(fā)的內(nèi)質(zhì)控是一種成分明確的轉(zhuǎn)錄本（RNA分子），可直接加入您的樣本并同時(shí)被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，可直接反應(yīng)儀器或相應(yīng)試劑是否正常，實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的體系是否存在錯(cuò)誤，以及反應(yīng)體系中是否存在抑制劑。因?yàn)閮?nèi)質(zhì)控和真實(shí)轉(zhuǎn)錄本的性質(zhì)相似，所以它可以在接下來的qPCR實(shí)驗(yàn)中用來確認(rèn)逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的成功與否（見圖：內(nèi)質(zhì)控可靠檢測是否存在抑制劑）。

Procedure

使用QuantiNova Reverse Transcription Kit進(jìn)行基因組DNA去除和cDNA合成僅需20分鐘。該試劑盒包含進(jìn)行快速cDNA合成的所需的一切成分。

純化后的RNA和gDNA Removal Mix簡單孵育即可除去基因組DNA污染。和其它方法不同的是，RNA樣本接下來可直接與Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的預(yù)混液混合，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。使用QuantiNova Reverse Transcriptase，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可以在低溫下進(jìn)行，包括對于復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)模板。反應(yīng)在42°C的溫度條件下進(jìn)行保證了RNA的完整性，并隨后在85°C進(jìn)行酶滅活以終止反應(yīng)。不需要進(jìn)行額外的RNA變性或RNase H降解。

Applications

QuantiNova Reverse Transcription Kit可從任何起始材料（包括激光微切割樣本或組織活檢樣本）獲得高效及高靈敏度real-time RT-PCR結(jié)果。