RNeasy Mini Kit (250)凱杰Qiagen試劑盒 分子生物試劑
RNeasy Mini Kit (250)凱杰Qiagen試劑盒
RNeasy Mini實驗方案。
使用RNeasy Mini Kit純化的總RNA具有高質量,適用于多種下游操作。實驗方案還包括部分純化的RNA、體外轉錄本和酶反應RNA的回收。不提供溶壁酶、酵母裂解酶或玻璃珠(酵母樣本需要)。因樣本來源的發育階段、種屬和生長條件的不同,從樣本中分離的RNA量也各異。由于RNA酶步驟富集的RNA種屬>200 nt,因此RNA產量不包括5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA。
從多種樣本中純化高品質RNA。
使用RNeasy Maxi Kit純化的總RNA的甲醛瓊脂糖凝膠電泳和northern印跡。從各種來源的樣本中分離總RNA(10 µg)上樣至各泳道。所有組織均來源于小鼠。酵母:Saccharomyces cerevisiae;E. coli菌株:HB101。32P標記的探針識別的(G)GAPDH;(E)翻譯延長因子EF-1α;和(O)外膜蛋白A序列。(E和O分別由瑞士巴塞爾大學的P. Philippsen和德國蒂賓根馬克斯-普朗克生物學研究所的U. Henning提供。)B. subtilis未采用探針檢測。M:0.24–9.5 kb RNA分子量標準。胚胎、Huh7和HeLa細胞泳道中的7.5 kb條帶(圖示)為核前體RNA。
對少至100個細胞的RNA進行RT-PCR。
使用RNeasy Mini Kit從圖示數目的HeLa細胞中分離的總RNA的RT-PCR。使用不含RNA酶的DNA酶酶切10 µl(1/5)洗脫液,并使用oligo-dT引物進行逆轉錄。使用2.5 µl(1/20)的cDNA混合物進行50 µl PCR。擴增452 bp的GAPDH片段。C-:陰性對照;C+:陽性對照;M:100 bp分子量標準。
RNeasy Mini離心柱。
RNeasy Mini Kit中提供RNeasy Mini離心柱。
RNeasy Mini Kit (250)凱杰Qiagen試劑盒
RNeasy Mini Kit可從至多30 mg動物或人類組織樣本,或從100–1 x 107個動物或人類細胞樣本或酵母中純化總RNA。
RNeasy Mini Kit純化得到的總RNA產量樣本來源 | 起始材料 | 平均產量(µg) |
---|---|---|
動物細胞 LMH HeLa COS-7 淋巴細胞(未受激) | 1 x 106 1 x 106 1 x 106 1 x 106 | 12 15 35 0.5 |
小鼠組織 肝 肺 脾 | 10 mg 10 mg 10 mg | 40 10 35 |
真菌細胞 S. cerevisiae | 1 x 107 | 25 |
RNeasy Mini Kit可從少量的樣本中高效純化總RNA。RNeasy純化技術整合了ben酚/異硫氰酸胍裂解的嚴謹性和硅膠膜純化的速度和純度,簡化了總RNA純化技術。純化得到高品質的RNA,并且DNA殘留水平達到zui低。
使用RNeasy技術純化得到的RNA的A260/280比為1.9–2.1(10 mM Tris-·Cl、pH 7.5的溶液中),適用于多種下游應用,包括:
特點 | 參數 |
Applications | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
Elution volume | 30–100 µl |
Format | Spin column |
Main sample type | Tissue, cells |
Processing | Manual (centrifugation) |
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | Total RNA |
Sample amount | 0.5–30 mg |
Technology | Silica technology |
Time per run or per prep | 20 minutes |
Yield | Varies |